Bagus Blog of Fisheries

Lets Improve Our Fisheries and Marine

Get Connected

Beri Makan Ikan


    Free Automatic Backlink 1000 Backlinks Free 100K Backlinks Backlinks Center Free SEO Backlinks Instant Backlinks SEO Bookmarks Dofollow Backlinks Premium Backlinks Top SEO Backlinks 1000 Backlinks Free Auto Backlinks Dofollow Backlinks Text Back Links Exchanges MAJLIS LINK: Do Follow BacklinkLink Portal Teks TVAutoBacklinkGratisjapanese instant free backlink Free Plugboard Link Banner ButtonFree Automatic Backlink Service Free Backlink Service, Links Building 4 Free Free Backlink Services Free Automatic Backlink Best Backlinks daily Bookmarks Free 1000 Backlinks Auto Dofollow Backlinks Backlinks Builder Dofollow Backlinks Free Hundred Backlinks Submit Your Site To The Web's Top 50 Search Engines for Free! Submit ExpressSEO Tools Dental Assistant DirectoryAziende Resource Direktori Indonesia WoW Range Best Web Directory

Koi Herpesvirus (KHV) Pada Cyprinus Carpio (Koi)

diposting oleh bagusrn-fpk09 pada 09 November 2012
di Penyakit Ikan - 0 komentar

Koi herpesvirus (KHV) merupakan virus penyebab kematian pada ikan koi di seluruh dunia, penyakit ini menyerang populasi koi Cyprinus carpio dan koi ikan mas Cyprinus carpio carpio. Pengamatan virus yang mirip seperti herpesvirus ditemukan dalam epitel insang ikan koi yang dilaporkan pada tahun 1997 di Jerman. Beberapa virus diisolasi dari koi melalui insang dan kulit di Belgia, Jerman, dan Korea. Setelah pemeriksaan lebih lanjut, virus ini ditemukan berbeda dengan KHV baik dari bentuk morfologi virion, sitopatik efek, kerentanan baris sel, atau kemampuan untuk menyebabkan peyakit pada koi. Sejak tahun 1998, virus telah menyebar dan bukti untuk KHV telah ditemukan di beberapa negara Eropa, amerika Serikat, Indonesia dan yang paling baru di koi dan ikan mas liar di Jepang. Dua virus seperti herpes lainnya telah diakui sebagai penyebab penyakit serius di antara ikan cyprinid. Cyprinid herpesvirus 1 (CyHV-1), juga disebut sebagai cyprinid herpesvirus (CHV), pertama kali diisolasi dari koi dan ikan mas pada tahun 1981 dan virus herpes cyprinid 2 (CyHV-2) disebut juga virus nekrosis hematopoietik pada ikan mas (GFHNV). Perbandingan DNA genomik danvirion polipeptida dari KHV CyHV-1 menunjukkanvirus terkait tetapi jelas berbeda dan hal inidapatdideteksi secara spesifik dengan uji PCR yang baru dikembangkan. Fitur biologis penting membedakan 3viruss seperti cyprinid herpesvirus CyHV-1, CyHV-2 danKHV. KHV berbeda dari CyHV-1 dengan menyebabkan penyakitdan kematian di antara semua ukuran ikan mas dan koi bukan hanya di antara ikan koi dan ikan carp berusia kurang dari 2 bulan.

Pertumbuhan optimal virus dalam sirip koi (KF-1) terjadi pada 20 sampai 25oC, tidak dapat tumbuh pada 30 atau 4oC dan pertumbuhannnya terbatas pada 10oC. Penelitian ini menggambarkan perkembangan metode realtime TaqMan PCR untuk KHV yang dapat digunakan untuk mendeteksi dan mengukur DNA KHV pada ikan yang terinfeksi. Pengujian digunakan untuk menilai konsentrasi DNA target virus seperti yang ditemukan dalam jaringan ikan koi yang terinfeksi pada suhu air 13, 18, 23, dan 28oC pada waktu tertentu tergantung pada pembongkaran virus.

Bahan dan metode yang digunakan pada penelitian ini ada virus strain (KHV-1) yang diisolasi dari koi dewasa yang mengalami kematian massal di Israel, CyHV-1 diperoleh dari Dr T. Sano dan Dr H. Fukuda, Tokyo Univesity of Fisheries, ginjal didapat dari ikan mas yang terinfeksi CyHV-2, IcHV-1 atau disebut juga CCV strain CA80-5 diisolasi dari epizootik juvenil dari Ichtalurus punctatus di California pada 1980 digunakan sebagai contoh dari virus herpes yang mirip deng KHV. Virus ditumbuhkan dalam baris yang sesuai sel dan dikawinkan seperti yang dijelaskan sebelumnya.

Ekstraksi asam nukleat dari virion dimurnikan. KHV dan CyHV-1 yang ditanam di KF-1 sel dan IcHV-1 yang ditanam di saluran ovarium lele  (CCO) sel yang dimurnikan dan DNA genomik diekstraksi. DNA yang tidak terinfeksi KF-1 sel dibandingkan dengan prosedur yang sama dengan virus yang dimurnikan.

Persiapan plasmid untuk kuantisasi TaqMan. Plasmid yang membawa KHV genom yang telah disiapkan. Secara singkat, genom DNA dimurnikan dari virion KHV diinkubasi dengan 10 U KPN I dan Sac saya endonuklease.Hasil Fragmen DNA dimasukkan ke dalam pGEM ®-7Zf (+) plasmid yang kemudian digunakan untuk mengubah DH5α sel Escherichia coli. Bakteri sel menyimpan sisipan KHV dipilih dan disaring dengan PCR menggunakan SP6/T7 primer mengapit situs insert.

Sistem real time kuantitatif PCR untuk tiap urutan target, 2 primer dan flourescently internal berlabel TaqMan probe. Persiapan sampel untuk TaqMan PCR didapat dari ikan koi yang dikorbankan dan disimpan ada suhu -80oC. Sumber ikan yang digunakan didapat dari produser ikan hias di California tanpa ada sejarah terinfeksi KHV. Kuantitas dari target DNA dari KHV dalam jaringan koi telah ditentukan dengan modifikasi dari perbandingan metode CTT. Hubungan dari konsentrasi DNA virus dengan respon terhadap waktu dari sebelum perombakan virus, jaringan dan suhu air dihitung dengan menggunakan analisis tiga varian (ANOVA).

Hasil optimasi dari tes real time PCR TaqMan diperoleh dengan pengujian berurutan dari target DNA dari plasmid yang dimurnikan dan kemudian dari percobaan penghitungan virus pada koi. Setiap reaksi TaqMan terkandung 400 nM setiap primer, 80 nM dari probe TaqMan di komersial tersedia PCR mastermix, 10 nM Tris-HCl (pH 8,3), 50 mM KCl, 5 mM MgCl 2, 2,5 mM deoxynukleotida trifosfat, 0,625 U AmpliTaq Emas DNA polimerase, 0,25 U UNG AmpErase, dan 5 ml dari DNA sampel diencerkan dalam volume akhir 25 ml. Itu sampel dari ditempatkan di 96-baik piring dan diuji dalam fluorometer otomatis. Itu kondisi optimal adalah 2 menit pada 50 ° C, 10 menit pada 95 ° C, 40 siklus 15 detik pada 95 ° C dan 60 detik pada 60 ° C.

Konsentrasi DNA KHV dievaluasi dalam 7 jaringan yang berbeda dari kelompok replikasi virus terpajan koi yang diadakan pada suhu air 13, 18, 23 dan 28oC. DNA virus terdeteksi antara virus koi pada 4 suhu air tetapi kematian adalah hanya diamati di antara ikan di 18, 23, dan 28 derajat C. Waktu dan suhu dan interaksi antara mereka yang terkena konsentrasi DNA virus terdeteksi di jaringan koi terkena KHV. Meskipun tidak ada pola diakui konsentrasi DNA virus seperti yang ditemukan pada jaringan yang berbeda dari waktu ke waktu, KHV genom salinan untuk semua jaringan meningkat dengan paparan waktu post virus dan dengan suhu air. Penyebaran virus yang sangat cepat dan sistemik ditunjukkan oleh kehadiran DNA virus dalam jaringan berganda 1 d post virus. Konsentrasi DNA terbesar ditemukan berada di ginjal, insang dan limpa, dengan setara genom virus secara konsisten dari 108 untuk 109 per 106 sel inang. Tingginya kadar KHV DNA juga ditemukan pada lendir, hati, usus, dan otak. Infeksi koi bertahan hidup di 62-64 pasca paparan virus d terkandung salinan genom rendah KHV (hingga 1,99 x 102 per 106 sel host) terdapat dalam insang, ginjal atau jaringan otak.

 

Download File PDF

Tinggalkan Komentar

Nama :
E-mail :
Web : tanpa http://
Komentar :
Verification Code :   
   

Pengunjung

    819.791